Szív, tumor és idegsejtek fókuszált miRNS és mRNS expressziós analízise

Előnézet	PDF (disszertáció) Download (3MB)
Előnézet	PDF (tézisfüzet) Download (470kB)
	PDF (tézisfüzet) Download (591kB)

Absztrakt (kivonat) idegen nyelven

A mikro RNS-ek olyan 17-25 nukleotid hosszúságú molekulák, amelyek nem kódolnak fehérjét, de mRNS kölcsönhatásuk révén hatással vannak a sejtek működésére. Több alapvető sejtélettani folyamatban meghatározó szerepet játszanak, mint például a sejtproliferáció, differenciáció, apoptózis szabályozás. Expressziójuk különböző kórfolyamatok során megváltozhat. Máig számos tumortípus esetében írtak le jellemző miRNS expressziós mintázatot, amely bizonytalan diagnózis esetén jelentősen megkönnyítheti a daganat osztályozását, illetve a betegség kimenetelének előrejelzését. A többszörösen telítetlen zsírsavak (PUFA) több élettani funkciót töltenek be az emlős szervezetben. Jelentős hatást gyakorolnak a génexpresszióra, szabályozva a négy transzkripciós faktor családot, továbbá fontos szerepet játszanak gyulladáscsökkentő és antiproliferatív metabolitok generációjában, ezzel modulálva az immunválaszt. A többszörösen telítetlen zsírsavak közül a legjelentősebbek az EPA, a DHA, a DPA és a GLA, melyek élettani hatása többirányú.Bár a többszörösen telítetlen zsírsavakat évek óta alkalmazzák kiegészítő terápiaként különböző gyulladásos, valamint daganatos betegségek esetén, ennek ellenére még mindig nem teljesen ismertek azok a molekuláris mechanizmusok, melyek a pozitív hatás kiváltásában szerepet játszanak.Munkánk célja olyan miRNS molekulák azonosítása volt, amelyek szerepet játszanak az apoptózis folyamatában, különböző citotoxikus anyagokkal szembeni szenzitivitás/rezisztencia kialakításában, valamint néhány speciális funkciót betöltő idegsejt működésében. Ehhez első lépésben olyan genomikai módszerek optimalizálását tűztük ki célul, amelyek segítségével fibrózus szövetekből is nagy mennyiségű és tiszta miRNS nyerhető ki. Ugyancsak új módszerek kidolgozására volt szükség az „egy sejt” génexpressziós profil meghatározásához is, különös tekintettel a sejtekben található mRNS és miRNS molekulák számának meghatározására. Az általunk optimalizált miRNS izoláló módszer megoldást jelent a kisméretű RNS molekulák fibrózus szövetekből történő izolálására. Az így nyert nagy tisztaságú minta lényegesen megnöveli a miRNS expressziót vizsgáló módszerek érzékenységét, amelyet DNS-chip, QRT-PCR és HTS PCR technikával is igazoltunk. A PUFA kezelés hatására a tumorsejtekben 6 miRNS-t validáltunk. Ezek expressziós eltérései alapján a miR-16, miR-20b, miR-22, miR-30c, miR-143 és a miR-145 kiemelkedő szerepet játszhatnak a tumorsejtek PUFA-kezelés hatására észlelt apoptózisa során. Az egysejt génexpressziós profil meghatározás során mRNS és miRNS markereket azonosítottunk, amelyek megbízható kontrollgénként működhetnek az agykéregben található neuronok vizsgálata során. Méréseinkkel mRNS szinten is igazoltuk az eddig csak funkcionálisan vizsgált GABA-A receptor jelenlétét neurogliaform sejtekben, illetve ennek potenciális biomarker szerepét.

Tétel nézet